A purificação da histidil-tRNA sintetase, a partir do extrato de Salmonella typhimurium, foi realizada em três fases. Os seguintes dados foram obtidos para cada uma das fases de purificação.
PROCESSO PROTEÍNA TOTAL (mg) ATIVIDADE TOTAL (unidades)
Extrato inicial 4276,0 27.800
Hidroxilapatita 215,6 16.500
DEAE- Sephadex 15,4 12.700
Fosfocelulose 2,32 11.700
a) Calcular o rendimento do processo de purificação;
b) O grau de purificação obtido pelo fracionamento.

Passo 1

Beleza, vamos resolver esse exercício juntos! A questão fala sobre a purificação de uma enzima chamada histidil-tRNA sintetase a partir de Salmonella typhimurium. Temos dados sobre a quantidade de proteína total e a atividade total em cada fase do processo de purificação. Vamos precisar entender de rendimento de purificação e grau de purificação para calcular os itens (a) e (b).

Passo 2

Primeiro, vamos calcular o rendimento do processo de purificação. O rendimento indica quanto da atividade inicial foi mantida após todo o processo. Para isso, usamos a fórmula:
Rendimento (%) = ( Atividade finalAtividade inicial ) times 100

Passo 3

Olha só os números: a atividade inicial é de 27.800 unidades e a atividade final, após todas as purificações, é de 11.700 unidades. Vamos substituir na fórmula:
Rendimento (%) = ( 11.70027.800 ) times 100

Passo 4

Fazendo o cálculo:
Rendimento (%) = ( 0,4201 ) times 100 = 42,01%

Passo 5

Agora, vamos calcular o grau de purificação. Isso nos mostra quanto a pureza da enzima aumentou durante o processo. Calculamos a atividade específica, que é a atividade por miligrama de proteína. A fórmula é:
Atividade específica = Atividade totalProteína total (mg) íí

Passo 6

Primeiro, calculamos a atividade específica na etapa inicial e na etapa final:
  • Inicial:
Atividade específica inicial = 27.8004276,0 approx 6,5 , unidades/mg í
  • Final:
Atividade específica final = 11.7002,32 approx 5.043,1 , unidades/mg í

Passo 7

O grau de purificação é a relação entre a atividade específica final e a inicial:
Grau de purificação = Atividade específica finalAtividade específica inicial = 5.043,16,5 approx 775,86 çãíí

Resposta

a) O rendimento do processo de purificação foi de aproximadamente 42,01%.
b) O grau de purificação obtido pelo fracionamento foi de aproximadamente 776 vezes.

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