A purificação da histidil-tRNA sintetase, a partir do extrato de Salmonella typhimurium, foi realizada em três fases. Os seguintes dados foram obtidos para cada uma das fases de purificação.
PROCESSO | PROTEÍNA TOTAL (mg) | ATIVIDADE TOTAL (unidades) |
---|---|---|
Extrato inicial | 4276,0 | 27.800 |
Hidroxilapatita | 215,6 | 16.500 |
DEAE- Sephadex | 15,4 | 12.700 |
Fosfocelulose | 2,32 | 11.700 |
a) Calcular o rendimento do processo de purificação;
b) O grau de purificação obtido pelo fracionamento.
b) O grau de purificação obtido pelo fracionamento.
Passo 1
Beleza, vamos resolver esse exercício juntos! A questão fala sobre a purificação de uma enzima chamada histidil-tRNA sintetase a partir de Salmonella typhimurium. Temos dados sobre a quantidade de proteína total e a atividade total em cada fase do processo de purificação. Vamos precisar entender de rendimento de purificação e grau de purificação para calcular os itens (a) e (b).
Passo 2
Primeiro, vamos calcular o rendimento do processo de purificação. O rendimento indica quanto da atividade inicial foi mantida após todo o processo. Para isso, usamos a fórmula:
Passo 3
Olha só os números: a atividade inicial é de 27.800 unidades e a atividade final, após todas as purificações, é de 11.700 unidades. Vamos substituir na fórmula:
Passo 4
Fazendo o cálculo:
Passo 5
Agora, vamos calcular o grau de purificação. Isso nos mostra quanto a pureza da enzima aumentou durante o processo. Calculamos a atividade específica, que é a atividade por miligrama de proteína. A fórmula é:
Passo 6
Primeiro, calculamos a atividade específica na etapa inicial e na etapa final:
- Inicial:
- Final:
Passo 7
O grau de purificação é a relação entre a atividade específica final e a inicial:
Resposta
a) O rendimento do processo de purificação foi de aproximadamente 42,01%.
b) O grau de purificação obtido pelo fracionamento foi de aproximadamente 776 vezes.