Um par de aminoácidos é separado em uma coluna cuja fase estacionária está saturada com água. O solvente de arraste é metanol, CH3OH. Quanto mais polar o ácido, mais fortemente ele será absorvido pela fase estacionária. Os aminoácidos que foram separados nessa coluna são (a) HOOCCHNH2CH2COOH e (b) HOOCCHNH2CH(CH3)2. Que aminoácido você esperaria que fosse eluído primeiro? Explique seu raciocínio.

A técnica de separação de que se trata é a cromatografia líquida em coluna. Como qualquer outra técnica cromatográfica, o princípio se baseia na separação dos compostos pela diferença de polaridade e pelas diferentes interações que esses compostos têm com as fases estacionária e móvel, devido às diferentes forças intermoleculares que agem em suas moléculas.

Se a fase estacionária está saturada com água, podemos seguramente dizer que é uma fase estacionária altamente polar e que estabelece ligações de hidrogênio. Logo, essa fase vai ter uma melhor interação com moléculas que sejam mais polares/que estabeleçam mais ligações de hidrogênio.

Sendo a fase móvel – o eluente – o metanol, CH3OH, também se trata de um eluente bastante polar e que realiza ligações de hidrogênio, porém não como a água, que “ganha” do metanol nesse aspecto. Então, nesse caso, é de se esperar que o metanol elua melhor a molécula mais apolar, que vai interagir melhor com a parte orgânica do metanol, que é seu átomo de carbono com seus hidrogênios.

Assim, a gente conclui que o aminoácido (b) vai ser eluído primeiro devido a melhor interação de (a) com a água, pois esse aminoácido é um diácido, ou seja, tem dois grupos carboxila realizando ligações de hidrogênio – mais que o aminoácido (b). Logo, ele, (a), vai ficar mais retido do que (b), eluindo mais tarde.